证券代码：002424 证券简称：贵州百灵 公告编号：2016-010
贵州百灵企业集团制药股份有限公司
关于糖宁通络研发项目的进展公告
本公司及董事会全体成员保证信息披露的内容真实、准确和完
整，没有虚假记载、误导性陈述或重大遗漏。
风险提示:
鉴于糖宁通络胶囊研发项目的复杂性、风险性和不确定性，糖宁
通络胶囊项目研制具有周期长、投入较大的情况，各阶段研究均具有
风险性，公司将及时履行信息披露义务，请投资者注意投资风险。
公司本次公告的研究报告为糖宁通络胶囊不同给药干预方式对
db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响的试验报告，实验的目的是采用
国际公认的 db/db 自发性糖尿病小鼠模型，研究糖宁通络胶囊长期
给药、停药和治疗给药对胰岛素抵抗的作用机理，为糖宁通络胶囊的
临床应用提供科学依据。本报告的结论存在与临床应用情况出现差异
的可能性风险。
本公告为研发项目进展公告，不会对公司目前经营产生重大影
响。
贵州百灵企业集团制药股份有限公司（以下简称：“公司”或“贵
州百灵”）2016 年 1 月 22 日收到中国医学科学院药用植物研究所编
制的《糖宁通络胶囊不同给药干预方式对 db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵
抗的影响报告》，现对该项目研发进展情况作如下信息披露。
试验基本情况：
1、试验药物名称：糖宁通络胶囊
2、试验单位：中国医学科学院药用植物研究所
3、试验内容：糖宁通络胶囊不同给药干预方式对 db/db 小鼠骨
骼肌胰岛素抵抗的影响
4、研究目的：采用国际公认的 db/db 自发性糖尿病小鼠模型，
研究糖宁通络胶囊长期给药、停药和治疗给药对胰岛素抵抗的作用机
理，为糖宁通络胶囊的临床应用提供科学依据。
试验报告内容详见附件：《糖宁通络胶囊不同给药干预方式对
db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响报告》。
敬请广大投资者谨慎决策，注意投资风险。
特此公告。
贵州百灵企业集团制药股份有限公司
董 事 会
2016 年 1 月 22 日
附件：
实 验 报 告
研究专题的名称：糖宁通络胶囊不同给药干预方式对
db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响
试验报告的审查、批准
专 题 负责人 孙晓波 签名 2015 年 12 月 10 日 撰写
试验室负责人 孙晓波 签名 2016 年 1 月 20 日 批准
试验单位：中国医学科学院药用植物研究所
试验地点：北京市海淀区马连洼北路 151 号
试验时间：2015.5.10-2015.12.10
目 录
目录…………………………………………………………………… 2
摘要…………………………………………………………………… 3
1.研究专题名称及研究目的………………………………………… 5
2.药效学评价研究机构和委托单位的名称及地址………………… 6
3.研究起止日期……………………………………………………… 7
4.供试品和对照品的名称、缩写名、代号、批号、稳定性、含量、
浓度、纯度、组分及其它特性…………………………………… 7
5.试验材料…………………………………………………………… 8
6.试验方法…………………………………………………………… 8
7.试验结果…………………………………………………………… 11
8.小结………………………………………………………………… 22
9.讨论………………………………………………………………… 22
10.影响研究可靠性和造成研究工作偏离试验方案的异常情况……25
11.专题负责人与所有参加工作的人员姓名和承担的工作内容……25
12.试验资料的保存项目、地点及时间…………………………… 25
摘 要
目的：采用国际公认的 db/db 小鼠自发性糖尿病动物模型，考察糖宁
通络胶囊长期给药，停药和治疗给药对 db/db 小鼠胰岛素抵抗的影
响，探索糖宁通络胶囊防治糖尿病的可能药效机制。
方法：
1. 糖宁通络胶囊长期给药对 db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响
60 只雌性 db/db 自发性糖尿病小鼠（6～8 周龄），随机分为 5
组，每组 10 只，分别为模型组、盐酸二甲双胍组、糖宁通络胶囊高
剂量组（1.8g/kg）、糖宁通络胶囊中剂量组（0.9g/kg）、糖宁通络胶
囊低剂量组（0.45g/kg），10 只同周龄雌性 C57/BL 小鼠为正常对照
组。各组灌胃给药，每日 1 次，灌胃体积 0.1ml/10g，连续给药处
理 38 周，其中空白对照组和模型组每天灌胃 0.1ml/10g 的饮用水。
2. 糖宁通络胶囊停药对 db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响
60 只雌性 db/db 小鼠随机分为 5 组，分别为模型组、盐酸二甲双
胍（0.14g/kg）组、胰岛素（10U/kg）组、糖宁通络胶囊高剂量（0.9g/kg）
组和糖宁通络胶囊低剂量（0.45g/kg）组，每组 12 只。12 只同周龄
雌性 C57/BL 小鼠为空白对照组。糖宁通络胶囊给药 16 周后，停药
12 周，然后继续给药 7 周。
3. 糖宁通络胶囊治疗给药对 db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影响
40 只雄性 db/db 小鼠随机分为 5 组，分别为模型组、盐酸二甲双
胍（0.14g/kg）组、糖宁通络胶囊高剂量（1.8g/kg）组、糖宁通络胶
囊中剂量（0.9g/kg）组和糖宁通络胶囊低剂量（0.45g/kg）组，每组
8 只。8 只同周龄雄性 C57/BL 小鼠为空白对照组。在 db/db 小鼠出现
糖尿病视网膜并发症时开始给予糖宁通络胶囊后给药 19 周。
4. 胰岛素抵抗信号通路相关蛋白检测方法
取 db/db 小鼠腓肠肌组织，提取组织蛋白，Western blotting 法测
定胰岛素抵抗信号通路相关蛋白胰岛素受体底物-1（IRS-1）和磷酸
化胰岛素受体底物-1（p-IRS-1）的表达水平。
结果：糖宁通络胶囊长期给药、停药和治疗给药均能增加 db/db 小鼠
骨骼肌 p-IRS-1 水平，具有剂量依赖性，糖宁通络胶囊可能通过上调
骨骼肌中的 p-IRS-1 水平，改善骨骼肌的胰岛素抵抗，发挥防治糖尿
病作用。
结论：糖宁通络胶囊长期给药、停药和治疗给药对 db/db 小鼠骨骼肌
的胰岛素抵抗信号通路具有影响，可能是糖宁通络胶囊防治糖尿病的
药效作用机制。
1 研究专题的名称及研究目的
1.1 研究专题名称：
糖宁通络胶囊不同给药方法对 db/db 小鼠骨骼肌胰岛素抵抗的影
响
1.2 研究背景和目的：
糖尿病是一种以慢性、高血糖为特征的糖、脂类和蛋白质代谢
异常相关疾病，已成为严重威胁人类健康的一大杀手。糖尿病作为
慢性病，需要长期服用药物，因此其长期用药的安全性和有效性值
得重点关注。糖尿病虽然以慢性高血糖为特征，但其最大的危害在
于其微血管并发症和大血管并发症。
糖尿病是一种因胰岛素绝对或相对不足，或者靶细胞对胰岛素
敏感性降低引起的以糖代谢紊乱为主的慢性综合性疾病，其中 2 型
糖尿病的发生是外周胰岛素抵抗和 β 细胞功能缺陷共同作用的结
果。研究表明：糖尿病的发生发展是进行性胰岛 β 细胞的衰竭过程，
胰岛素抵抗加速了胰岛 β 细胞衰竭过程。2 型糖尿病患的血糖和血脂
代谢异常由胰岛素抵抗和 细胞功能衰竭两因素促成，其中胰岛素
抵抗更为重要。胰岛素抵抗导致的持续性高血糖（即所谓糖毒性）和
脂质紊乱造成的高 FFA、TG （即所谓脂毒性） 对 -细胞功能进一
步损害。可见，保护 -细胞功能的关键在于持续有效地改善糖和脂
质代谢，根本在于有效改善胰岛素抵抗。
通过生活方式改变和药物干预，可以有效地减少和延缓糖尿病
的发生发展。理想的新型降糖药物应该是可以有效治疗肥胖、有效
改善胰岛素抵抗、保护胰岛 β 细胞功能、减少和改善糖尿病并发症、
提高生活质量并且药品可及价格合理。
如何有效防控 2 型糖尿病，开发理想的新型降糖药物是临床医
生和制药企业面临的共同难题。中药及复方由于具有多成分、多靶
点的作用特点，在治疗慢性非传染性疾病方面具有一定的优势，从
中药复方中筛选有效组方是新药开发的途径之一。由于小鼠和人类
功能基因的同源性高达 90%以上，并且 db/db 小鼠是 Leptin 受体基
因缺陷导致的先天性 2 型糖尿病小鼠，具有高血糖、胰岛素抵抗、
糖代谢异常，合并糖尿病视网膜和肾脏病变等多种疾病，与人类 2
型糖尿病发病机制和临床症状极为相似是一种良好的糖尿病药物研
究动物模型。因此，本研究选择这种自发性糖尿病小鼠作为研究工
具，考察降糖的同时，更多关注胰岛素抵抗，胰岛 β 细胞功能和糖尿
病并发症的改善。
1.3 研究目的：
采用国际公认的 db/db 自发性糖尿病小鼠模型，研究糖宁通络胶
囊长期给药、停药和治疗给药对胰岛素抵抗的作用机理，为糖宁通
络胶囊的临床应用提供科学依据。
2 药效学评价研究机构和委托单位的名称及地址
2.1 药效学评价研究机构
名称：中国医学科学院药用植物研究所
地址：北京市海淀区马连洼北路 151 号
邮编：100193
电话：010-57833013
2.2 委托单位：贵州百灵企业集团制药股份有限公司
地址： 贵州省安顺市经济技术开发区西航大道
电话：（0851）33418777
3 研究起止日期
试验起始日期：2015 年 4 月 10 日
试验结束日期：2015 年 10 月 10 日
4 供试品及对照品的名称、缩写名、代号、批号、稳定性、含量、
浓度、纯度、组分及其它特性
4.1 供试品
名称： 糖宁通络胶囊
批号：20130401
提供者：贵州百灵企业集团制药股份有限公司
接收时间：2015 年 4 月 1 日
性状： 胶囊，内容为黑褐色粉末
溶解性：可溶于水
稳定性：稳定
保存条件：密封
保存场所：中国医学科学院药用植物研究所样品室
剩余供试品处理方法：留样
4.2 对照品（溶剂）
名称：蒸馏水
4.3 供试品配制
4.3.1 配制方法：用蒸馏水配制成所需浓度。
4.3.2 配制频率：试验现用现配。
5 试验材料
5.1 试验动物
SPF 级自发性糖尿病小鼠模型 C57/KsJ-db/db 小鼠（简称 db/db
小鼠），6～8 周龄，体重 45～55g；由中国科学院上海试验动物中心
/上海斯莱克试验动物有限责任公司提供。
5.2 试验药物
糖宁通络胶囊胶囊（批号：20130401，规格：0.3g/粒，相当于
1.1g 生药/粒，人用量每次 3 粒，每日三次）由贵州百灵企业集团制
药股份有限公司提供。
盐酸二甲双胍片由中美上海施贵宝制药有限公司生产（批号：
1406155）。适应症：高胰岛素血症，2 型糖尿病。用法用量：通常本
品（盐酸二甲双胍片）的起始剂量为 0.5 克，每日二次。日用药量为
1g。
5.3 仪器
稳豪型血糖试纸（批号：3623898）和稳豪型血糖仪购自强生（上
海）医疗器材有限公司。酶标仪购自帝肯（上海）公司。日立 7080 全
自动生化仪购自日本日立株式会社。电子天平购自梅特勒托利多仪
器（上海）有限公司。
6 试验方法
6.1 试验分组与给药方法
6.1.1 糖宁通络胶囊长期给药对 db/db 小鼠胰岛素抵抗的影响
60 只雌性 db/db 自发性糖尿病小鼠（6～8 周龄），随机分为 5
组，每组 10 只，分别为模型组、盐酸二甲双胍组、糖宁通络胶囊高
剂量组（1.8g/kg）、糖宁通络胶囊中剂量组（0.9g/kg）、糖宁通络胶
囊低剂量组（0.45g/kg），二甲双胍联合糖宁通络胶囊中剂量组
（0.9g/kg），10 只同周龄雌性 C57/BL 小鼠为正常对照组。各组灌胃
给药，每日 1 次，灌胃体积 0.1ml/10g，连续给药处理 38 周，其中
空白对照组和模型组每天灌胃 0.1ml/10g 的饮用水。
6.1.2 糖宁通络胶囊停药对 db/db 小鼠胰岛素抵抗的影响
60 只雌性 db/db 小鼠随机分为 5 组，分别为模型组、盐酸二甲双
胍（0.14g/kg）组、胰岛素（10U/kg）组、糖宁通络胶囊高剂量（0.9g/kg）
组和糖宁通络胶囊低剂量（0.45g/kg）组，每组 12 只。12 只同周龄
雌性 C57/BL 小鼠为空白对照组。糖宁通络胶囊给药 16 周后，停药
12 周，然后继续给药 7 周。
6.1.3 糖宁通络胶囊治疗给药对 db/db 小鼠胰岛素抵抗的影响
40 只雄性 db/db 小鼠随机分为 5 组，分别为模型组、盐酸二甲双
胍（0.14g/kg）组、糖宁通络胶囊高剂量（1.8g/kg）组、糖宁通络胶
囊中剂量（0.9g/kg）组和糖宁通络胶囊低剂量（0.45g/kg）组，每组
8 只。8 只同周龄雄性 C57/BL 小鼠为空白对照组。db/db 小鼠出现糖
尿病视网膜并发症后，给药 19 周。
6.2 Western blotting 法测定胰岛素抵抗信号通路相关蛋白表达
（1）蛋白提取
取骨骼肌，称重，加入添加了蛋白酶抑制剂，磷酸酶抑制剂和
PMSF 的组织蛋白抽提试剂，冰上裂解 30min。放入预冷的离心机离
心，12000rpm 离心 15min。吸取上清液至预冷的 EP 管中，-80°C 保
存待用。
（2）蛋白定量
2.1 将 BCA 试剂盒中的 BSA 标准品用 PBS 依次稀释为 2000，
1000， 500，250，125μ g/mL 共 5 个浓度。将样品用 PBS 稀释 10
倍。将标准品和样品分别加入 96 孔板中，50μ L/孔。
2.2 将 BCA 试剂盒中 A 液和 B 液以 50: 1 的比例混合，加入
96 孔板中，200 L/孔。
2.3 37°C 孵育 1h，酶标仪 562nm 处检测各孔的 OD 值
2.4 以 OD 值为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2.5 根据标准曲线计算样品的浓度。将 SDS-PAGE 上样缓冲液
与蛋白样品按 1：4 混匀。
2.6 煮沸 5min，使蛋白充分变性，-80°C 保存待用。
（3） 聚丙烯酰胺凝胶电泳
3.1 将 30% Acri-Bis、分离胶缓冲液，10% APS，TEMED 和双
蒸水混匀，配制 10%的分离胶，缓慢注入凝胶模具，用蒸馏水水封
闭，凝聚 30min。
3.2 待分离胶和蒸馏水之间出现清晰的界面后，倒去蒸馏水，
将 30% Acri-Bis、浓缩胶缓冲液，10% APS，TEMED 和双蒸水混
匀，配制 6%的浓缩胶，缓慢注入凝胶模具并插上梳子，凝聚 30min.
3.3 将凝胶板装入电泳槽，在电泳槽中加入 1×电泳液。小心的
拔出梳子，用微量移液器将 20 L 样品缓缓加至凝胶孔中。80V 电泳
至溴酚蓝到达分离胶底部。
3.4 将胶安装至转膜装置，100 V，300mA 转膜 1h。
3.5 取 NC 膜置于 5%脱脂牛奶（TBST 配制）摇床封闭 2h。
3.6 一抗 4°C 孵育过夜。
3.7 TBST 洗膜 3 次，每次 15min，HRP 标记的二抗孵育 2h
3.8 TBST 洗膜 3 次，每次 15min，用增强型 ECL 显色液避光孵
育 5 min，用凝胶成像系统进行显影拍照。
7 试验结果
7.1 糖宁通络胶囊长期给药对 db/db 小鼠骨骼肌 IRS-1 磷酸化水平的
影响
如图 1 所示，与 C57/BL 小鼠比较，db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1
磷酸化水平显著降低；与 db/db 小鼠比较，二甲双胍和糖宁通络胶囊
高、中、低剂量长期给药能增加 db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1 磷酸化水
平，且具有剂量依赖性。
图 1 糖宁通络胶囊长期给药能够能够增加 IRS-1 的磷酸化水平
7.2 糖宁通络胶囊停药对 db/db 小鼠骨骼肌 IRS-1 磷酸化水平的影响
如图 2 所示，与 C57/BL 小鼠比较，db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1
磷酸化水平显著降低；二甲双胍和胰岛素停药能够增加 db/db 小鼠骨
骼肌的 IRS-1 磷酸化水平。糖宁通络胶囊停药高、低剂量也显著上调
db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1 磷酸化水平。
图 2 糖宁通络胶囊停药能够增加 IRS-1 的磷酸化水平
7.3 糖宁通络胶囊治疗给药对 db/db 小鼠骨骼肌 IRS-1 磷酸化水平的
影响
如图 3 所示，与 C57/BL 小鼠比较，db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1
磷酸化水平显著降低，二甲双胍治疗给药能够增加 db/db 小鼠骨骼肌
的 IRS-1 磷酸化水平。高、中、低剂量糖宁通络胶囊停药能够增加
db/db 小鼠骨骼肌的 IRS-1 磷酸化水平，且具有剂量依赖性。
图 3 糖宁通络胶囊治疗给药能够增加 IRS-1 的磷酸化水平
结论：糖宁通络胶囊采用多种干预方式干预（长期给药 38 周、给药
16 周停药 12 在给药 7 周， 26~28 周龄再进行给药治疗 19 周）均能
增加 db/db 小鼠骨骼肌 IRS-1 的磷酸化水平，具有剂量依赖性，提示
糖宁通络胶囊能够改善 db/db 小鼠的骨骼肌胰岛素抵抗。
讨论：
UKPDS研究的长期随访结果显示：虽然强化治疗病人血糖控制
的效果明显较好，但所有治疗组（磺脲类药物、二甲双胍、胰岛素）
病人的高血糖在6年中均进行性加重，并伴有β细胞功能进行性减退。
UKPDS研究的一个重要结论是: 无论使用何种药物（磺酰脲，二甲双
胍或胰岛素）， 血糖控制恶化不可避免；也就是说糖尿病进展中伴随
着胰岛β-细胞功能进行性减退，常用的治疗方法无一能够延缓疾病进
程。
2型糖尿病患的血糖和血脂代谢异常由胰岛素抵抗和细胞功能
衰竭两因素促成，其中胰岛素抵抗更为关键。胰岛素抵抗导致的持续
性高血糖（即所谓糖毒性）和脂质紊乱造成的高FFA、TG （即所谓
脂毒性） 对-细胞功能进一步损害。可见，保护-细胞功能的关键
在于持续有效地改善糖和脂质代谢，根本在于有效改善胰岛素抵抗。
胰岛素抵抗是指胰岛素执行其正常生物作用的效应不足，表现为
外周组织尤其是肌肉，脂肪组织对葡萄糖的利用障碍，早期胰岛β细
胞尚能代偿性地增加胰岛素分泌弥补效应不足，但久而久之，胰岛β
细胞的功能就会逐步衰弱，导致糖耐量异常和糖尿病发生。
在众多心血管疾病的危险因素中胰岛素抵抗处于核心地位，或
者说胰岛素抵抗是多种疾病，特别是糖尿病及心血管共同的危险因
素，是滋生多种代谢相关疾病的共同土壤。流行病学资料显示，胰岛
素抵抗在糖尿病及心血管疾病发病之前多年就可存在，常常与肥胖、
年龄的增长、高血压、高脂血症相伴随。因此，胰岛素抵抗是促使糖
尿病、高血压、高血脂等疾病发展发生的重要原因。
血糖的调节主要受“胰岛素受体/IRS-1/PI3K/磷酸肌醇依赖的蛋
白激酶/蛋白激酶B/葡萄糖转移因子4”信号途径的影响。胰岛素受体
底物（IRS）是胰岛素信号传递的重要介质，其中IRS-1在胰岛素信号
转导通路中的作用尤为重要。IRS-1在体内多个组织中均有表达，其
中在胰岛β细胞、肝脏、骨骼肌和脂肪组织中表达最为丰富。
研究显示，2型糖尿病患者及其亲属不管其是否伴有糖耐量损害，
均存在胰岛素抵抗IR。文献和本试验研究均表明：自发性2型糖尿病
大鼠肌肉组织IRS-1蛋白表达及磷酸化水平均有下降，而与IR相关。
本研究表明：糖宁通络胶囊长期给药和治疗给药均能增加db/db
小鼠骨骼肌IRS-1 的磷酸化水平，具有剂量依赖性；前期研究结果：
糖宁通络显著降低糖尿病小鼠HOMA-IR指数，提示糖宁通络胶囊对
db/db小鼠胰岛素抵抗具有抑制作用。该研究初步提示：苗药组方糖
宁通络降糖作用的分子机制之一，即通过上调胰岛素受体底物1
（IRS-1）的磷酸化水平，修复胰岛素信号通路发挥其降糖作用有关。
以往的研究结果显示：糖宁通络具有显著降糖作用、降低胰岛素
抵抗（HOMA-IR）指数，同时具有一定的降脂作用，保护胰岛β细胞。
改善胰岛素抵抗从根本上改善糖代谢和血脂代谢异常，从而减轻持续
性高血糖（即所谓糖毒性）和脂质紊乱造成的高FFA、TG （即所谓
脂毒性）对-细胞功能的进一步损害，使-细胞得到多重保护。
中药复方（包括民族药）的疗效是由其组成的各种药效物质与机
体大分子之间相互作用的结果。复方多成分决定了其作用的多靶点和
多环节，不同组分对不同病理环节起作用，最终表现出对病理状态下
机体的整体调节作用。苗药糖宁通络通过上调骼肌IRS-1 的磷酸化水
平，改善胰岛素抵抗可能是其降血糖、降血脂改善并发症等综合作用
的内在网络靶点之一。糖尿病及并发症发生发展的分子机制尚不完全
清楚，大致涉及炎症反应、氧化应激和血管内皮损伤等多环节相关，
糖宁通络降糖及治疗并发症的作用机制尚待进一步探索研究。
8 影响研究可靠性和造成研究工作偏离试验方案的异常情况
在试验过程中未出现造成研究偏离试验方案的异常情况。
9 专题负责人与所有参加工作的人员姓名和承担的工作内容
9.1 专题负责人：孙晓波
9.2 给药及临床症状观察负责人：孙桂波
参加人员：孙桂波、孟祥宝、陈亚萍、梁甜、汪梦霞、赵静宇
9.3 动物饲养管理及检疫负责人：孙桂波
参加人员：孙桂波、孟祥宝、陈亚萍、梁甜、汪梦霞、赵静宇
9.4 供试品保管负责人：孙桂波
9.5 资料保管负责人：孙晓波
10 试验资料的保存项目、地点及时间
10.1 保存项目：专题负责人任命书、试验方案、使用动物有关资料、
有关供试品的资料、原始记录及原始数据（体重、
给药、一般状态观察等）、解剖相关资料、质量保证
相关的资料、总结报告书及其它资料。
10.2 保存地点：中国医学科学院药用植物研究所。
注：本试验仅对提供的供试品负责。
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